Laboratory Instruments • Cell Analysis

Flow Cytometer

Flow Cytometer adalah instrumen yang menganalisis sifat fisik dan kimiawi ribuan sel per detik saat sel mengalir satu per satu melalui sinar laser dan memancarkan cahaya hambur serta fluoresensi.

Overview

Apa itu FCM?

Flow Cytometer adalah instrumen yang menganalisis sifat fisik dan kimiawi ribuan sel per detik saat sel mengalir satu per satu melalui sinar laser dan memancarkan cahaya hambur serta fluoresensi.

Untuk karakterisasi, hitung, dan sortir sel berdasarkan ukuran, granularitas, dan ekspresi marker protein. Multi-parameter 10-50 warna sekaligus.

Satu-satunya alat yang bisa analisis 50.000 sel/detik dengan 20 parameter. Standar emas imunofenotiping CD4/CD8, leukemia, stem cell, dan vaksin. LOD 1 sel/μL.

Real Example

Contoh Penggunaan

Imunofenotiping HIV: % CD3+ CD4+ CD8+ dalam darah. Atau QC CAR-T: % CD3+ CD19 CAR+ sebelum infus pasien.
Application

Kapan FCM Digunakan?

Imunologi & Klinis

Karakterisasi populasi sel darah.

  • CD4/CD8 HIV Monitoring
  • Leukemia Imunofenotipe
  • Lymphocyte Subset
  • Stem Cell CD34+

Biopharma & Terapi Sel

QC produk sel dan vaksin.

  • CAR-T CD19 CAR+
  • MSC Potensi
  • Vaksinitas Sel T
  • Apoptosis Annexin V

Riset & Mikrobiologi

Analisis sel tunggal cepat.

  • Siklus Sel PI
  • Intracellular Cytokine
  • Bakteri Viability
  • ROS dan Ca2+
Sample Types

Jenis Sampel

Sampel Contoh Tujuan
Sel Tunggal Suspensi Darah, PBMC, Splenocyte Harus single cell. Agregat menyumbat nozzle.
Sel Kultur HEK293, T Cell Coba harus hidup >90%. Trypsin dan cuci dulu.
Partikel/Mikroba Bakteri, Beads Ukuran 0.5-50 μm. Butuh trigger FSC rendah.
Output

Hasil Analisis

Plot 2D/1D populasi sel + tabel % gate dan MFI.

  • Gating Strategy Hierarki gate: FSC/SSC > Singlets > Live > Marker+. % populasi.
  • MFI Mean Fluorescence Intensity Level ekspresi marker. Makin tinggi = makin banyak antigen.
  • Compensation Matrix Koreksi spillover antar fluorophore. Wajib untuk panel >4 warna.
Working Principle

Bagaimana Cara Kerja FCM?

Sel diberi label antibodi fluoresensi, lalu disuspensi dan disuntikkan ke aliran sheath fluid. Hidrodynamic focusing membuat sel jalan satu baris. Tiap sel lewat sinar laser. Cahaya hambur FSC=ukuran, SSC=granularitas. Fluorofor terpancar dan dipisah filter ke detector PMT. Pulsa listrik dianalisis jadi dot plot.

  1. Staining: inkubasi sel dengan panel antibodi 30 menit, cuci.
  2. Resuspensi dalam buffer FACS. Filter 40 μm hilangkan agregat.
  3. Akuisisi: set threshold FSC, voltage PMT, kompensasi.
  4. Jalankan sampel 10.000-100.000 event. Simpan file FCS.
  5. Analisis: gating di FlowJo. % populasi dan MFI.
Learn Before You Use

Pelajari Konsep Dasarnya Terlebih Dahulu

FSC vs SSC Gating

Gate populasi dulu berdasarkan ukuran dan granularitas sebelum lihat marker.

Fluorescence Compensation

PE tumpah ke FITC. Wajib pakai single-stain control untuk koreksi spillover.

Panel 20 Warna

Pilih fluorophore dengan spektrum terpisah. Bright dye untuk marker redup.

Live/Dead Staining

Sel mati non-spesifik binding antibodi. Wajib pakai Zombie atau PI.

File FCS Standard

Format universal flow cytometry. Bisa dibuka FlowJo, FCS Express.
Related Products

Available Systems

BD Biosciences FACSLyric Beckman Coulter CytoFLEX LX Agilent NovoCyte Penteon

Precision is Language. Integrity is Law