Laboratory Instruments • Spectroscopy

UV-Visible Spectrophotometer

UV-Vis Spectrophotometer adalah instrumen yang mengukur penyerapan cahaya ultraviolet 190-400 nm dan cahaya tampak 400-800 nm oleh sampel untuk menentukan konsentrasi, kemurnian, atau identitas senyawa.

Overview

Apa itu UV-Vis Spectrophotometer?

UV-Vis Spectrophotometer adalah instrumen yang mengukur penyerapan cahaya ultraviolet 190-400 nm dan cahaya tampak 400-800 nm oleh sampel untuk menentukan konsentrasi, kemurnian, atau identitas senyawa.

Untuk analisis kuantitatif berdasarkan Hukum Beer-Lambert A = εbc, uji kemurnian asam nukleat, protein, dan identifikasi gugus kromofor organik.

Metode cepat, non-destruktif, dan murah. Akurasi bergantung pada linearitas Beer-Lambert dan validasi panjang gelombang. Ini metode standar QC farmasi untuk assay sederhana.

Real Example

Contoh Penggunaan

Uji kadar Paracetamol dalam tablet diukur pada 257 nm sesuai Farmakope Indonesia, atau rasio A260/A280 untuk cek kemurnian DNA.
Application

Kapan UV-Vis Spectrophotometer Digunakan?

Farmasi

Uji kadar dan kemurnian bahan baku dan sediaan.

  • Assay Kandungan API
  • Uji Disolusi
  • Uji Kestabilan
  • Identifikasi Farmakope

Life Science

Kuantifikasi biomolekul.

  • Kuantifikasi DNA A260
  • Kuantifikasi Protein A280
  • Rasio Kemurnian A260/A280
  • Uji Bradford

Lingkungan & Pangan

Deteksi kontaminan dan parameter kualitas.

  • Nitrat dan Nitrit dalam Air
  • Logam dengan Reagen Warna
  • Indeks Permanganat
  • Warna Produk
Sample Types

Jenis Sampel

Sampel Contoh Tujuan
Larutan API, Reagen, Ekstrak Mengandung kromofor yang menyerap UV-Vis.
Biomolekul DNA, RNA, Protein Basa nukleotida serap 260nm, aromatik aa serap 280nm.
Kompleks Berwarna Logam-Dithizone Reaksi kolorimetri menghasilkan warna untuk deteksi.
Output

Hasil Analisis

Grafik Absorbansi vs Panjang Gelombang dan nilai A pada λ tertentu.

  • Konsentrasi mg/mL Dihitung dari A = εbc dengan kurva kalibrasi atau ε molar.
  • A260/A280 Ratio DNA murni = 1.8-2.0. Protein = 0.57. Kontaminasi fenol <1.8.
  • Spektrum Scan 190-800nm Sidik jari kromofor untuk identifikasi dan cek kemurnian.
Working Principle

Bagaimana Cara Kerja UV-Vis Spectrophotometer?

Sumber cahaya Deuterium untuk UV 190-400nm dan Tungsten Halogen untuk Vis 400-800nm. Monokromator memilih λ. Cahaya melewati sampel di kuvet 1cm. Detector mengukur intensitas I vs intensitas blanko I0. Absorbansi dihitung A=log(I0/I) sesuai Beer-Lambert. Ada 2 tipe: Single Beam = ukur blanko lalu sampel. Double Beam = ukur bersamaan lebih stabil.

  1. Nyalakan alat dan lakukan auto-zero dengan blanko pelarut.
  2. Lakukan wavelength accuracy check dengan holmium oxide filter USP <857>.
  3. Masukkan sampel dalam kuvet kuarsa untuk UV atau plastik untuk Vis.
  4. Ukur absorbansi pada λmax senyawa target atau lakukan wavelength scan.
  5. Hitung konsentrasi dari kurva kalibrasi atau faktor ekstingsi ε.
Learn Before You Use

Pelajari Konsep Dasarnya Terlebih Dahulu

Hukum Beer-Lambert

Hanya linier A 0.1-1.0. Terlalu pekat = deviasi negatif. Terlalu encer = noise.

Pemilihan Kuvet

Kuarsa untuk UV <350nm. Plastik/kaca hanya untuk Vis >350nm. Jangan tertukar.

Baseline dan Blanko

Blanko harus matriks yang sama tanpa analit. Wajib zero setiap ganti pelarut.

Validasi λ

USP <857> wajib cek akurasi λ dengan holmium oxide tiap tahun.

Stray Light

Cahaya bocor menyebabkan A >2.0 tidak akurat. Batasi pengukuran <1.5 AU.
Related Products

Available Systems

Agilent Cary 3500 UV-Vis Shimadzu UV-2600i UV-Vis Thermo Scientific Evolution 260 Bio

Precision is Language. Integrity is Law